Методы определения антибиотиков в молоке. Тест 4sensor (форсенсор)

Анализ молока на содержание антибиотиков

Молоко относится к основным продуктам питания. Особенно важно оно для детей. Его качество контролируется на государственном уровне. Для этого применяются различные методы и комплексы. Среди последних наиболее популярным является экспресс тест для определения антибиотиков в молоке 4 sensor (форсенсор).

Нормативные документы анализа молока

Допустимые пределы содержания в молоке различных веществ указаны во многих документах. В ГОСТ Р 52090-2003 изложены основные требования по органолептическим и физико-химическим показателям, даны ссылки на ГОСТы с нормативами по сортности и прочим характеристикам (в настоящее время отменен, вместо него рекомендуется пользоваться ГОСТ 31450-2013 Молоко питьевое. Технические условия). Микробиологические показатели приведены в СанПин 2.3.2.1078-2001. Здесь же указаны предельные нормы по содержанию радионуклидов, микотоксинов, пестицидов, антибиотиков и прочих токсичных веществ. С 1.05.2014 г. начал действовать Межгосударственный технический регламент ТР ТС 033/2013 «О безопасности молока и молочной продукции». В нем предусмотрено определение в четырех групп антибиотиков.

Также приняты ГОСТы по методике обнаружения в молоке вредных веществ:

  • ГОСТ 32254-2013 Молоко. Инструментальный экспресс-метод определения антибиотиков

  • ГОСТ 32901-2014 Молоко и молочная продукция. Методы микробиологического анализа

  • ГОСТ Р 51600-2010 Молоко и молочные продукты. Микробиологические методы определения наличия антибиотиков

  • ГОСТ 32219-2013 Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков (ГОСТ Р 53774-2010 с идентичным названием отменен).

Принятие перечисленных выше и многих других документов необходимо по той причине, что молоко загрязняется нежелательными для человека веществами. Это происходит, как неизбежно, так и вследствие халатности производителей.

Среди вредных компонентов, которые попадают в данный продукт, нередко встречаются антибиотики.

Как антибиотики оказываются в молоке?

Коровы болеют довольно часто. Лечат животных разными лекарствами, в том числе, антибиотиками. На сегодняшний день в ветеринарной практике используется более 50 разновидностей препаратов данной группы. В основном, они применяются при респираторных болезнях, мастите (в том числе – для профилактики) и инфекционных заболеваниях. Принятые медикаменты в итоге попадают в молоко, в котором присутствуют не в чистом виде, а в остаточных количествах.

Кроме того, для экономии корма, интенсивного увеличения живого веса (разница в привесе - до 30%) и стимуляции роста молодняка тоже применяются антибиотики. Их включают в кормовые добавки в субтерапевтических (то есть, в меньших, чем для лечения) количествах. Но и эти препараты тоже оказываются в молоке, притом, даже в тех случаях, когда добавки вносились минимально.

Как показывает практика, в фермерских хозяйствах, после выздоровления коровы, ее продукцию редко проверяют на наличие антибиотиков. По санитарным правилам, после того, как буренку пролечили, полученное от нее молоко надо сливать в течение от 5 до 10 дней (точный срок зависит от вида лекарственного препарата). Сдавать его на молзавод нельзя! Тем не менее, в периоды, когда в общем по стране наблюдается недостаток данного сырья, фермеры, чтобы не терять прибыль, иногда выливают такое молоко в общие бидоны. То есть, разбавляют его. В результате, концентрация антибиотиков действительно снижается, но, все равно, они никуда не исчезают.

Какой вред приносят антибиотики?

Первыми от наличия в сырье антибиотиков страдают производители. Указанные лекарственные препараты являются ингибиторами – они замедляют процесс сквашивания, а то и вовсе прекращают его. Поэтому, если такое молоко попадает на линию производства кисломолочных продуктов, то оно нарушает ход технологического процесса, из-за чего компания терпит убытки. Кстати, по этой причине является непреложным тот факт, что в кисломолочке антибиотики отсутствуют по определению.

Накопление лекарств в организме любого потребителя молока и молокопродуктов, приносит большой вред здоровью человека. Снижается иммунитет, может развиться аллергия (в основном – из-за пенициллина) или дисбактериоз. По некоторым данным – наблюдается увеличение веса. Тетрациклин может стать причиной снижения аппетита, вызвать проктит или гастрит, а также фотосенсибилизацию кожи (повышенную чувствительность к УФ лучам). Он вредит печени и способен нарушить состав крови. Стрептомицин вреден для нервной системы. Левомицетин, который ветеринары применяют довольно часто, угнетает кроветворную систему.

Антибиотики подавляют активность ферментов, изменяют микрофлору человеческого организма, распространяя ее устойчивые виды. Кипячения эти медпрепараты не боятся. В сухом молоке их не меньше, чем в исходном сырье, при сушке они не разрушаются.

Еще одна «бомба замедленного действия» заключается в том, что накопление антибиотиков становится причиной возникновения устойчивости (резистентности) организма по отношению к медикаментам. Поэтому, если, при каком-нибудь (обычно воспалительном) заболевании, человека придется лечить данными препаратами, они окажутся неэффективными.

Методы определения наличия антибиотиков в молоке

Иммунологические и микробиологические методы

К иммунологическим методам относятся экспресс тесты на антибиотики в молоке. Их действие основано на анализе интенсивности реакции специфических рецепторов – белков, связанных с частицами золота. Технология удобная, от лаборанта не требуется специальное химическое образование. Результат получают быстро, в среднем на исследование требуется от 5 до 10 минут. Считывающее устройство не обязательно, в некоторых случаях надо применять инкубатор, для создания необходимой температуры пробы в пределах от + 40 до + 50 град С. Анализ можно делать в полевых условиях, термостаты подключаются к источнику питания 12/24В. Каждый тест рассчитан на определение одной или нескольких (до четырех) групп антибиотиков.

В основу ингибиторных микробиологических методов положено влияние антибиотиков на штаммы микроорганизмов. Наличие медпрепаратов в молоке обнаруживается при диффузии их в агар – определением интенсивности торможения развития тестовых культур, которые были внесены в питательную среду.

Молоко помещают в виалы (небольшие, от 0,3 до 20 мл стеклянные или пластиковые лабораторные флаконы) с питательной средой. В ней содержится штамм бактерий Bacillus strearothermophius calidolactis. А также индикатор кислотности. При росте или снижении рН, он изменяет окраску среды, по которой определяют наличие антибиотиков в пробе.

Виалы инкубируют 3 часа при Т = 64 град С. Если в пробе антибиотиков нет, то бактерии быстро развиваются, кислотность меняется, а вместе с ней – и цвет среды. Если же медикаменты в молоке есть, то они угнетают рост бактерий, рН не меняется, цвет среды остается таким же, как в начале анализа.

Преимущество подобных тестов заключается в возможности в течение одного исследования обнаружить полный спектр антибиотиков и других ингибиторов. Недостаток – сравнительно долгое время работы, обязательное применение инкубатора. Такой способ больше подходит для перерабатывающих предприятий, а не для фермеров. Стоимость ингибиторного микробиологического метода ниже, чем экспресс-теста.

Люминесцентные методы

Эти методы основаны на сенсибилизированной люминесценции ионов Tb (III) и Eu (III). Обычно они применяются для определения медпрепаратов хинолонового и тетрациклинового ряда. Органические лиганды, к которым относятся и антибиотики, характеризуются высокими молярными коэффициентами поглощения. Они интенсивно впитывают энергию возбуждения. При этом, если энергия лиганда в триплетном состоянии больше, чем тот же параметр иона лантанида на резонансном уровне, то она может ему передаваться. Ион возбуждается и начинает излучать кванты света.

Электрохимические методы

Такие способы применяются для обнаружения медикаментов тетрациклиновой группы. Используется ионометрия и амперометрическое титрование. Ионные ассоциаты антибиотиков, с гетерополианионами структуры Кеггина, выступают в роли электродно-активного компонента мембран ионселективных электродов. При амперометрической технологии титрантом является 12-молибдофосфорная кислота. Достоинствами методики являются ее селективность, простота проведения и высокая чувствительность.

Хроматографические методы

Технологии данной группы основаны на определении изменения интенсивности молекулярной постколоночной люминесценции антибиотиков (в основном, тетрациклинового ряда), которая усиливается при образовании комплексов с катионом циркония (IV). Самым эффективным считается метод ВЭЖХ с ультрафиолетовым или флуоресцентным детектированием.

В молочной промышленности применяются, в основном, иммунологические и микробиологические тесты. К первой группе относятся инкубаторные и безинкубаторные способы.

4sensor (Форсенсор)

Тест 4sensor

Назначение форсенсора

Тесты на антибиотики в молоке 4sensor (форсенсор) являются одним из наиболее популярных в данной группе по той причине, что с их помощью можно одновременно определить наличие сразу четырех медикаментов: β-лактамного типа (пенициллина и цефалоспорина), тетрациклиновой группы, левомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина.

Набор рассчитан на работу с различными видами сырья – не только с натуральным молоком, но также с пастеризованным или сухим. Последнее в количестве 10 г смешивается в 90 мл подогретой до 40 град С дистиллированной воды. Можно исследовать сыворотку, в том числе, сухую. Свернувшееся молоко проверять нельзя.

Данный комплект включен в качестве тест-набора №7 в ГОСТ 32219-2013 «Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков» (пункт 3.10, сноска №7). Одна упаковка рассчитана на 96 тестирований.

Устройство форсенсора

Инкубатор-термостат HeatSensor DUOТесты на антибиотики в молоке 4 сенсор состоят из двух компонентов:

  • Микролунка (пробирка), для пробы молока. В ней имеется определенное количество моноклональных белковых антител (рецепторов), меченых коллоидным золотом.

  • Тест – полоска хроматографической бумаги. Она представляет собой набор мембран с линиями связывания. Каждая мембрана настроена на определенный вид антибиотиков.

Так как в процессе анализа проба молока должна быть подогрета до 40 град С, то для работы с комплектом нужен инкубатор-термостат. Производитель рекомендует применять только Heatsensor . Остальные, как сказано в инструкции к набору, не подходят. В том же документе говорится, что, если инкубатор отсутствует, можно пользоваться водяной баней.

Считывание данных выполняется двумя способами: визуально или с помощью специального аппарата Readsensor . Второй метод позволяет выполнить диагностику более точно, а также зафиксировать результаты исследований.

Порядок работы форсенсора

  • Включить инкубатор Heatsensor. Его можно будет использовать после того, как температура поднимется до 40 град С. На это требуется около 10 минут.

  • Поставить микролунку в термостат.

  • В пробирку с реагентами пипеткой добавить 0,2 куб. см. молока. Перемешать его до гомогенизированного состояния. Проба должна быть однородной и жидкой, без расслоения на фазы, осадка или сгустков. Для перемешивания надо 5 раз наполнить лунку и слить содержимое с помощью пипетки. Если пробирок несколько, то для каждой на пипетке должен быть «свой» наконечник. Рекомендуемая температура сырья до помещения в инкубатор – от 4 до 20 град С. Смешивать надо быстро, так как, после добавления молока в микролунку, между находящимися в ней химическими веществами и пробой начинается реакция.

  • Закрыть крышку инкубатора. Нажать кнопку «Старт». Действия пп. 3 и 4 тоже следует выполнять максимально оперативно.

  • По истечении 5 минут (этот период называется первая инкубация, отсчет ведется с помощью вмонтированного в Heatsensor таймера), раздаются звуковой и световой сигналы. Выключить установку.

  • Поместить в микролунку тест-полоску.

  • Снова нажать «Старт». Продолжить нагрев в течение еще 5 минут (вторая инкубация).

  • После окончания, выключить прибор, вынуть тест-полоску и положить ее на лист бумаги. Прочитать результат. Это надо сделать в течение 5 минут после окончания анализа, не позже (не зависимо от того, визуально или с помощью Readsensor). Если итоги положительные, их надо подтвердить дополнительным исследованием.

Визуальное считывание результатов работы форсенсораВизуальное считывание результатов

Начинать расшифровку необходимо с проверки наличия контрольной линии вверху полоски. Если ее нет, анализ следует считать недействительным. Если есть, тогда проверяют тестовые линии – по очереди, сверху вниз: тетрациклин, левомицетин, стрептомицин, бета-лактамы. Проверка заключается в сравнении интенсивности цветовой окраски двух линий – контрольной и тестовой, соответствующей определенному антибиотику .

Если цвет тестовой линии более интенсивный, чем контрольной, это значит, что результат – отрицательный. Данный антибиотик в пробе молока отсутствует, либо содержится на более низком уровне, чем приведен в справочной таблице. Если же тестовая светлее, чем контрольная, равная ей или вовсе отсутствует, то – положительный. Количество этого препарата соответствует нормативному или больше данного значения.

Таким способом надо проверить состояние всех тестовых полос. Если по какой-то из них невозможно понять, светлее она или такая же, как контрольная, значит, результат по ней считается положительным и требует повторного исследования.

Принцип действия форсенсора

В основу технологии положена комплексообразующая реакция антибиотиков четырех указанных выше групп с меченными коллоидным золотом белковыми рецепторами. После проведения анализа, проводится визуальное, или с помощью специального аппарата, определение наличия рецепторов, которые остались свободными.

Чем больше их осталось свободными, тем, значит, меньше частиц антибиотиков вступили с ними в реакцию, тем ниже содержание медикамента в молоке и, как следствие, тем более интенсивным получается цвет соответствующей тестовой линии. Если же медпрепарата «много», то его частицы связывают все или почти все рецепторы. Так как свободных рецепторов остается «мало» или нет вовсе, то тестовая линия окрашивается ими слабо или совсем не видна.

После того, как молоко нальют в микролунку в термостате и включат прибор на первую инкубацию, находящийся в пробирке реагент суспензируется с пробой. Моноклональные антитела (рецепторы) связываются с веществами, которые проверяются на наличие в молоке (то есть, с антибиотиками).

Через 5 минут нагрева аппарат выключается, и в лунку помещают тест-полоску. Проверяемая жидкость начинает подниматься по полоске, проходя через расположенные на ней зоны поглощения. Если искомых антибиотиков в молоке в достаточном количестве нет, то в этих зонах должны появиться цветные линии. Если есть, то линии окажутся бледными или не появятся совсем, в зависимости от концентрации соответствующего медпрепарата.

Heatsensor

HeatSensor AERNE 230V APP004

HeatSensor DUO APP032 – это портативный инкубатор-термостат для работы экспресс-методом со всеми тестами Unisensor. Рассчитан на одновременное исследование 2-х проб.

Его основным узлом является металлический нагреватель, расположенный в пластиковом корпусе. Тепловой блок работает по методу электромагнитной индукции. Поддерживает оптимальную для анализа температуру 40 град С, с точностью до плюс-минус 3 град С. По истечению срока инкубации, включается световой и звуковой сигналы. Полоски выбрасываются автоматически. Данные выводятся на дисплей.

В продаже имеется HeatSensor OCTO APP052, предназначенный для одновременной работы с 8-ю пробами . А также HeatSensor AERNE 230V APP004 – на 24 пробы .

Readsensor

Readsensor АРР038 / АРР039 – это считывающее устройство, предназначенное для точного определения наличия антибиотиков по исследованиям, проведенным с помощью любых тест-полосок Unisensor. Работает автономно или с компьютером. Значительно упрощает определение результатов и делает его более точным. Может отправить данные на мини-принтер.

У прибора есть несколько опций, которые выбираются, в зависимости от среды и условий анализа. Предусмотрено 2 рабочих режима: длительный и быстрый (последний запрограммирован по умолчанию). В первом случае надо ввести все показания оператора и реагентов. Во втором – только номер пробы.

Справа на приборе есть выдвижная ячейка с отверстием (прорезью) в центре. В нее вставляется тест-полоска. Чтобы молоко с индикатора не попало в оптическую часть аппарата, пропитанный жидкостью фильтр надо удалить.

Результаты появляются на дисплее через 10 секунд после установки полоски в ячейку и включения устройства в режим считывания.

Регулярное и повсеместное использование экспресс-тестов, как и других технологий определения антибиотиков в молоке, является надежным барьером для проникновения медпрепаратов в организм человека через продукты питания. В конечном итоге, это важный элемент здорового образа жизни населения страны.


Анализаторы качества молока Клевер 2 и Лактан Кориолисовый счетчик

Рекомендуемые товары

← Назад к списку обзоров и советов

написать комментарий
*Имя *e-mail